https://www.mdu.se/

mdu.sePublikationer
Ändra sökning
RefereraExporteraLänk till posten
Permanent länk

Direktlänk
Referera
Referensformat
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association-8th-edition
  • vancouver
  • Annat format
Fler format
Språk
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Annat språk
Fler språk
Utmatningsformat
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf
Optimering av FISH- teknik för detektion av Laktobaciller
Mälardalens högskola, Akademin för hållbar samhälls- och teknikutveckling.
2008 (Svenska)Självständigt arbete på avancerad nivå (magisterexamen), 10 poäng / 15 hpStudentuppsats
Abstract [sv]

Sammanfattning

Syftet med den här studien var att utveckla och optimera FISH (Fluorescense In Situ Hybridisation) tekniken som en snabb och ganska billig metod för detektion av laktobaciller. Det vill säga att kunna på objektsglas använda FISH tekniken för att identifiera laktobaciller på artnivå med fluorescensmärkta prober mot 16S och 23S RNA. FISH är en allmän och användbar metod för att detektera och lokalisera mikroorganismer eller en specifik grupp av mikroorganismer i provet (1). Metoden detekterar DNA- eller RNA- sekvenser med hjälp av fluorescensmärkta prober som hybridiseras specifikt med komplementära målsekvenser i intakta celler (2). Detta innebär att man behåller cellmorfologin och tillför en lättdetekterad fluorescerande färg. I början av studien utvaldes två grupper av bakterier, gramnegativa bakterier som har tunnare cellvägg, vilket underlättar hybridiseringen och grampositiva laktobacillus med en tjockare cellvägg. Enligt tidigare undersökningar gav FISH tekniken bra resultat om rätt probe användes för rätt organism. Som anvisning till den här studien användes en tidigare studie på E.coli K12.(6). I början av den här studien användes samma prober som i studien med E.coli K12. Bakterierna i grupp 1 valdes utifrån homologi mellan probernas sekvens och målsekvensen hos bakterierna. De hade 100 % homologi med probe 1 och hög homologi, 83-100 %, med probe 2 ,vilket väl överensstämmer med resultatet för E. coli. Bakterierna odlades i lämpliga medier och prov togs från log-fas. Bakterierna behandlades med hybridiseringsbuffert och studerades under fluorescensmikroskop. Stark fluorescens iakttogs i flertalet av bakterierna i de fall som homologi mellan probe och målsekvens var hög. Effekten av tiden för förvaring i kyl efter skörd på fluorescensförmågan studerades också. Fluorescensen efter en dag jämfördes med fluorescensen efter 15 dagar och 30 dagar hos samma bakterie. Bakterierna fotograferades i fluorescensmikroskop samt ljusmikroskop och resultaten presenteras i respektive tabeller och/eller bilder. Resultaten visade en sänkning i fluorescensstyrka och i antal bakterier som lyste redan efter 15 dagar. Efter 30 dagar hade nästan alla bakterier upphört att reagera med proben, oavsett vilken art som studerades. Slutligen studerades kvaliteten på tvättningar. Fluorescensbilder togs av bakterierna efter en tvätt och jämfördes med bilder efter 2 och tre tvättar. Ingen stor skillnad observerades efter flera tvättningar jämförd med en tvätt. Studien visade att den teknik som utvecklades är användbar för att detektera specifika sekvenser både i grampositiva och gramnegativa bakterier.

Ort, förlag, år, upplaga, sidor
2008. , s. 18
Nyckelord
FISH
Nationell ämneskategori
Kemiteknik
Identifikatorer
URN: urn:nbn:se:mdh:diva-4448OAI: oai:DiVA.org:mdh-4448DiVA, id: diva2:127371
Presentation
Mälardalens högskola, Eskilstuna (Svenska)
Uppsök
teknik
Handledare
Examinatorer
Tillgänglig från: 2008-12-05 Skapad: 2008-12-04 Senast uppdaterad: 2008-12-05Bibliografiskt granskad

Open Access i DiVA

fulltext(2586 kB)1258 nedladdningar
Filinformation
Filnamn FULLTEXT01.pdfFilstorlek 2586 kBChecksumma SHA-512
a565ef9015672e8e6f56ef6eef059f27f52d06e3797c03b8ea65d0bf2bf8f81e5c83eb3502bf48170106f668889b96fa10002bcd6bd3e645674b6b14a5f98d9a
Typ fulltextMimetyp application/pdf

Av organisationen
Akademin för hållbar samhälls- och teknikutveckling
Kemiteknik

Sök vidare utanför DiVA

GoogleGoogle Scholar
Totalt: 1261 nedladdningar
Antalet nedladdningar är summan av nedladdningar för alla fulltexter. Det kan inkludera t.ex tidigare versioner som nu inte längre är tillgängliga.

urn-nbn

Altmetricpoäng

urn-nbn
Totalt: 394 träffar
RefereraExporteraLänk till posten
Permanent länk

Direktlänk
Referera
Referensformat
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association-8th-edition
  • vancouver
  • Annat format
Fler format
Språk
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Annat språk
Fler språk
Utmatningsformat
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf